6 概述
尿素氮为人体蛋白质分解代谢的产物,90%以上通过肾脏排泄,其余的则由肠道和皮肤排出。当肾脏发生各种病变,正常的排泄功能遭到破坏时,即引起血液尿素氮浓度升高。血液中尿素氮的含量是肾功能变化的一项重要指标。
7 原理
尿素在脲酶催化下,水解生成氨和二氧化碳,氨在α-酮戊二酸和还原型辅酶Ⅰ存在下,经谷氨酸脱氢酶催化生成谷氨酸。同时,还原型辅酶Ⅰ被氧化成氧化型辅酶Ⅰ。还原型辅酶Ⅰ在340nm波长处有吸收峰,而氧化型辅酶Ⅰ几乎无吸收峰,其吸光度下降的速率与待测样品中尿素氮的含量成正比。其反应式如下:
8 试剂
pH 8.0
尿素酶 8000u/L
谷氨酸脱氢酶(GLDH) 700u/L
还原型辅酶Ⅰ(NADH) 0.3mmol/L
α-酮戊二酸 150mmol/L
ADP 1.5mmol/L
以上酶试剂可以自配或购买试剂盒。液体酶试剂在冰箱存放可稳定10天,室温(15~25℃)只能保存3天。
尿素氮标准应用液(17.85mmol/L)同二乙酰-肟法。
9 操作方法
(1)必须具备有恒温装置的分光光度计,或用自动分析仪,其参数为:温度30℃或37℃,波长340nm,平衡时间30s,读数时间30s。
(2)取试管四支,标明测定、质控、标准和空白,然后按表1操作。
以上各管依次逐管加入酶试剂,混匀后立即在分光光度计上监测其吸光度的变化(△A/min)。
10 正常值
脐带: 7.5~14.3mmol/L (21~40mg/dl)
早产儿: 1.1~8.9mmol/L (3~25mg/dl)
婴儿、儿童:1.8~6.4mmol/L (5~18mg/dl)
成人: 2.5~6.4mmol/L (7~18mg/dl)
>60岁: 2.7~7.5mmol/L (8~21mg/dl)