β-半乳糖苷酶

1 拼音

β-bàn rǔ táng gān méi

2 英文参考

β-galactosidase

3 概述

β-半乳糖苷酶是一种能把乳糖水解成葡萄糖和半乳糖的酶。EC3．2．1．23。一般是指能将β-半乳糖苷水解为半乳糖和糖苷的酶。很早以来，就被认为是大肠杆菌诱导酶的典型。分子量54万，为四聚体。其结构基因为LacZ，与LacY（半乳糖苷透性酶）和LacA（半乳糖苷转乙酰酶）同组成乳糖操纵子，并在特异的乳糖操纵系统中的阻遏物、操纵基因、启动子等的协同下，支配调节β-半乳糖苷酶的合成。当培养基中无诱导物质时，每一细胞中虽然没有几个分子的β-半乳糖苷酶；但一旦被诱导，则每一世代都能合成多达几千个分子的酶。另外，β-半乳糖苷酶一般广泛存在于动植物界中。

GAL是细胞溶酶体中的水解酶，在肾近曲小管上皮细胞中含量较高。尿中GAL活性可反映肾实质，特别是肾小管的早期损伤，与尿中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）一同测定作尿酶谱分析，有助于病程观察和预后评价。在遗传学领域中对人类β-半乳糖苷酶缺陷病的诊断（包括产前诊断）和基础研究也是重要的指征。国内近年合成了2-氯-4-硝基酚-β-半乳糖苷（CNP-GAL）作为GAL测定的色原底物，实现了GAL的速率法分析，可用于生化自动分析仪。

4 β-半乳糖苷酶的医学检查

4.1 检查名称

β-半乳糖苷酶

4.2 分类

血液生化检查 > 酶类测定

4.3 β-半乳糖苷酶的测定原理

样品中GAL在规定温度和pH下作用于底物CNP-GAL的糖苷键进行水解，生成色原CNP，可在400～405nm波长测定每分钟吸光度变化（△A），即CNP生成速度，据此计算GAL活性。

4.4 试剂

（1）柠檬酸缓冲液（50mmol/L， pH5.0）

称柠檬酸（MW210.14）        4.2g

柠檬酸三钠（MW294.12）      8.8g

β-环糊精（β-cyclodextrin）  4g

用水溶解后定容至1L，调pH5.0

（2）底物溶液（2mmol/L CNP-GAL）：取CNP-GAL（MW335.71）34mg，用柠檬酸缓冲液（50mmol/L，pH5.0）溶解后定容至50ml。

4.5 操作方法

（1）手工速率法：尿样100μl，加入底物溶液1.0ml，混匀后测初始吸光度A₁，并立即启动秒表计时，37℃保温10min整，立即测第2吸光度A₂。波长400～405nm，算出1min吸光度变量：

酶活性计算：

式中V_T：反应溶液总体积；

V_S：样品体积；

ε：CNP在规定pH（5.0）和波长下的摩尔吸光系数；

1：光径（cm）。

例如：

［注］4965为pH5.0，波长405nm下CNP的摩尔消光系数实测值，此值应在各实验室所用分析仪器上自行测定计算。

（2）连续监测法：在自动分析仪或半自动分析仪上作连续监测分析时要根据所用仪器型号自行设定实验参数。

4.6 正常值

血清0.2～0.4U/L尿中GAL排出率，参考范围2.5～14.3IU/gCr。

4.7 临床意义

尿中GAL和NAG同属细胞溶酶体酶，主要来源于肾小管上皮细胞，因而对肾小管损伤和后天性疾患有较敏感的反应，在肾实质损伤的不同阶段，GAL和NAG的排出率曲线有一定差异，二者用于酶谱分析，会有助于临床诊断及预后的评价。

4.8 附注

（1）本方法线性范围可达220IU/L。

（2）缓冲液pH对消光系数有明显影响，对pH要求准确校正到规定值。

（3）其余可参阅“N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶”部分。

（4）在遗传学领域的应用可参阅有关专著及文献。