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第三节 DNA及寡核苷酸探针在原位杂交组织化学中的应用
...甲醛(PBS新鲜配制):室温20min。 (7)PBS/5mmol/lMgCl2漂洗10min×2。 (8)脱水,自低浓度到高浓度,无水乙醇各3min,空气干燥。 2.预杂交封闭非特异性杂交位点,20μl/每张切片,42℃水浴半小时。 3.杂交10~20μl/...
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丙型肝炎病毒体外感染原代人胎肝细胞的研究
...片:用镊子从培养板中取出细胞爬片,立即用0.01mol/L的PBS漂洗3次,每次30s。然后用4%多聚甲醛固定15min,再用PBS漂洗3次,置于-20℃保存,备免疫组化检测细胞内的HCV抗原表达或用原位杂交对细胞内的HCVrNA进行定位。 细胞及培...
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雷公藤甲素对诱导CD4+、CD8+T细胞凋亡的作用
...抗人CD4或CD8单克隆抗体1μl,置冰上反应40min。用1×Hanks液漂洗两次后用RPMI1640液重悬细胞,以1×108细胞加入补体(新鲜豚鼠血清)1ml,37°C,5%CO2孵箱中反应45min。用1×Hanks液充分漂洗后用RPMI1640液重悬,并以每孔1×105细胞培养于96孔...
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第二节 原位分子杂交技术在电镜水平的应用
...交过程须注意防止镍网上的杂交液干掉。 7.杂交后漂洗 含50%甲酰胺的2×SSC液 37℃ 30min 含50%甲酰胺的1×SSC液室温30min 无甲酰胺的1×SSC液室温20min 样品置1×SSc 4℃过夜 0.01mol/LPBS(pH7.2)室...
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核因子-kappaB的实验研究
...1.1抽提核蛋白[5]药物作用细胞1h后收集细胞,预冷的PBS漂洗2次,以BufferA(10mMHepes,pH7.9,10mMKCl,0.1mMEDTA,0.1mMEDTA,1mMDTT,0.5mMPMSF)重悬,10min后加入l0%NP40至终浓度0.6%,混匀后l2000rpm4℃离心20s,弃上清,以BufferB(20mMHepes,pH7.9...
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酶免疫电镜操作步骤
...的双面刀片切成50~100µm的薄组织再行固定1h~2h。3.漂洗以PBS液漂洗过夜,换液3~4次。4.血清孵育,25℃1h或4℃过夜,孵育的标本放置于加盖的瓷盘内,底层垫数层纱布。防止抗血清干燥凝固,不易洗脱,造成非特异性吸...
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第二节 cRNA探针在原位杂交组织化学
...可与组织产生较高的非特异性结合,但此缺陷可在杂交后漂洗液中加用酶漂洗来解决。最近,Wolf等(1987)建议插入确定长度的寡核苷酸至载体内产生cRNA分子,这种cRBA分子称为“寡核苷酸核酸探针”(oligoribo-probes)已被成功...
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组织染色后封片技巧
...显色后,入蒸馏水洗3次。如是漂片染色,应在用蒸馏水漂洗后才将其裱在粘附剂处理过的载玻片上。对生长在盖玻片上的培养细胞,实验过程是在培养板内完成的,终止显色后,盖玻片用蒸馏水漂洗,洗后尽量吸出水份。经漂...
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离体脊髓星形胶质细胞的纯化与鉴定
...瓶后,在37℃、280r/min摇18h,倒去培养液并用新鲜培养液漂洗3次,将所得纯化星形胶质细胞用二次酶消化法传代,用含血清(10%)培养液将细胞密度调至1×106/mL,种植到培养皿中的盖玻片上(用作免疫组化鉴定)和培养瓶内...
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组织切片的原位杂交细胞化学方法
...盐液不接触,但可保持盒内空气湿润。 (12)杂交后漂洗 ①以小烧杯盛适量4×SSC溶液,将载片一端斜插入溶液内,轻轻抖动以移除盖玻片。 ②将载片置于有刻度的染色用小方玻缸内,加入42℃(预热)4×SSC,3×20min。...
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庆大霉素对内侧橄榄耳蜗传出神经毒性作用的形态学观察
...,室温下行组化染色。首先经0.1%H2O2处理30min,0.1mol/LPBS漂洗,后用1%TritonX-100处理1h,0.1mol/L马来酸缓冲液(pH6.0)漂洗,再置组化反应液(含35μmol/L碘代乙酰硫化胆碱、5μmol/LK3Fe(CN)6、30μmol/LCuSO4、50μmol/L枸橼酸钠)中作用50min,经5...
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乳腺导管癌的诊断标准判断初探
...(据一抗具体说明而定),酶修复或热修复;(3)蒸馏水漂洗,置于PBS中;(4)滴加3%的过氧化氢阻断过氧化物酶,避光孵育30min;(5)蒸馏水漂洗,置于PBS中5min2次;(6)在37℃下一抗孵育120min;(7)PBS漂洗5min2次;(8)在37℃下Envisi...
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雷公藤对哮喘豚鼠IL-5、GM-CSF基因转录的影响及作用机制
...。细胞涂片ISH的主要步骤如下:0.3%TritonX-100通透10min,PBS漂洗,0.1mol/L甘氨酸漂洗5min,4%PFA固定5min,PBS漂洗,0.25%(V/V)乙酸酐/0.1mol/L三乙醇胺漂洗10min,2×SSC37℃漂洗10min,加探针杂交液后置湿盒内42℃孵育过夜,系列SSC漂洗,4%PFA...
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几种饲料去霉去毒法
...饲料进一步干燥,以达到去霉防霉变的目的。 2.漂洗法 对玉米、大豆等颗粒状原料,用清水漂洗或用2%石灰水进行反复漂洗,即能去除霉菌毒素。 3.热处理法 对于饼粕类原料,在150℃的温度下焙...
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供应室工作流程及注意事项
...作去污的过程包括6个步骤:分类、浸泡、清洗、用自来水漂洗、用去离子水漂洗、干燥。(1)分类:不要直接用手进行分类,锐利物品必须放在防刺容器内进行传送。(2)浸泡:用1%~2%的食用碱浸泡玻璃物品,用洗涤剂浸泡大量...
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乳腺导管癌诊断标准的建立与应用
...切片(据一抗具体说明而定),酶修复或热修复;(3)蒸馏水漂洗,置于PBS中;(4)滴加3%的过氧化氢阻断氧化物酶,避光孵育30min;(5)蒸馏水漂洗,置于PBS中5min2次;(6)在37℃下一抗孵育120min;(7)PBS漂洗5min2次;(8)在37℃下Envision孵育45min...
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脱基质型松质骨对成骨细胞内游离钙及碱性磷酸酶水平的影响
...消化15min,弃消化液,再次加入消化液,30min后弃去。PBS漂洗两次后加入消化液,37℃消化90min后收集上清液,1000rpm离心10min收集细胞,PBS漂洗并离心两次。加入10%小牛血清以1×106/ml接种于50ml培养瓶中,于37℃、5%CO2培养箱中培养...
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流感病毒对MDCK细胞核转录因子表达的影响
...S-P染色在0、12、24、72h各时相点分别挑取玻片,用0.1mol/LPBS漂洗3次,加4%多聚甲醛50μl固定40min,0.1mol/LPBS漂洗3次,3%过氧化氢室温下10min,0.1mol/LPBS漂洗3次,加5%山羊血清于37℃静置30min,吸弃血清,加1:100稀释的P65抗体,于37℃静置3h,4℃过...
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地高辛标记cRNA探针
...制)10min。 (5)在4%多聚甲醛/PBS3min。 (6)以PBs漂洗2×3min。 (7)浸入新鲜配制的0.25%乙酸酐(0.1mol/L三乙醇胺配制)10min,以封闭非特异性结合部位。 (8)2×SSC漂洗15min。 2.杂交以含cRNA探针(0.5ng/ml)的杂...
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地高辛配基随机标记DNA探针
...洗膜液计算。 (1)在室温下用2×SSC/0.1%(W/V)SDS溶液漂洗,5min,2次。 (2)在65℃条件下用0.1×SSC/0.1%SDS溶液漂洗,10min,2次。 (3)在室温下用2×SSC溶液漂洗1次。 5.免疫测定 (1)配制溶液 缓冲液1:Tris...
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大豆饼粕提取干酪素技术
...质溶液中,调pH4~4.5,静置3~4小时使其完全沉淀。 4漂洗 用虹吸法吸去沉淀物上层之清水,再加入清水搅匀沉淀后去除水,如此反复4~5次,使pH值保持在5~6。 5干燥 把漂洗后的沉淀物用离心机离心去水,置于50...
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放射免疫对流电泳
...电流2.6cm×7.5cm的小板用4mA。4.电泳后,平板浸在3%HCl中漂洗8h,换液2次。5.用流水漂洗过夜。6.干燥室温或鼓风机吹干。7.曝光在暗室将胶片切成与平板一样大小,然后将药面密接凝胶面,再在胶片上压一张玻板,用黑布包...
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桔皮油的加工
...--- 生产桔皮油的工艺流程:原料→选择→浸灰水→漂洗→压榨→过滤→分离→静置与抽滤→包装。 技术要点: (1)原料的选择新鲜无霉烂的红桔、南宁桔、三湖蜜桔、温州蜜柑及椪柑等果皮均可供制冷榨桔皮油...
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担体的相关知识介绍
...处理担体20-30分钟,然后用自来水冲洗至中性,再用甲醇漂洗,烘干备用。此法主要除去担体表面的铁等无机物杂质。2、碱洗法:用10%的氢氧化钠或5%的氢氧化钾-甲醇溶液浸泡或回流担体,然后用水冲洗至中性,再用甲醇...
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桔皮油的加工
...--- 生产桔皮油的工艺流程:原料→选择→浸灰水→漂洗→压榨→过滤→分离→静置与抽滤→包装。 技术要点: (1)原料的选择新鲜无霉烂的红桔、南宁桔、三湖蜜桔、温州蜜柑及椪柑等果皮均可供制冷榨桔皮油...
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使用担体处理原因和方法
...理担体20-30分钟,然后用自来水冲洗至中性,再用甲醇漂洗,烘干备用。此法主要除去担体表面的铁等无机物杂质。 2、碱洗法:用10%的氢氧化钠或5%的氢氧化钾-甲醇溶液浸泡或回流担体,然后用水冲洗至中性,再用甲...
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脊髓腹侧神经元的纯化培养与鉴定
...用NF200分别与ChAT和GFAP进行免疫荧光双标,弃培养液,PBS漂洗2次后加入4%PFA室温固定30min,PBS漂洗5min×4,加NF200抗体(1∶1000)每盖片50μl,37℃湿盒孵育1h后4℃冰箱过夜,PBS漂洗5min×3次,TRITC标记山羊抗小鼠IgG(1∶400)37℃...
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龟胶熬制技术
...盘肉腐烂,皮板分离后放掉秽水,再加入清水搅拌冲洗,漂洗除掉黑皮,将漂洗过的龟板再用清水浸泡1~2个月,取出摊置于阳光下曝晒,每日翻动3~4次,任夜间露水或雨水淋洗。待干备用。 2.煎取胶汁。熬取胶汁,一般在...
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第一节 原位杂交技术在染色体铺片的应用
...或其它的清洁液内过夜,次日用自来水冲洗,继之蒸馏水漂洗,在60~75℃干燥,然后把载片孵育在2%丙酮液内,室温,60min。自来水冲洗,再在60~75℃干燥; (13)每张载片上加10μl的细胞混悬液,空气干燥,在24h后可应用...
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光敏生物素核酸探针原位杂交组化程序
...保温12~16h。 (11)4×SSC洗脱盖片,并在同一液中37℃漂洗10~30min。 (12)2×SSC(含20μg/mlRNaseA,适于RNA探针)冲洗30min,37℃。 (13)1×SSC,0.1×SSC,37℃各漂洗10~30min。 (14)0.05mol/lPBS冲洗4×5min。 (15)3%BSA(0....