3 概述
以杜鹃花科越橘属蓝莓（Vacciniumcorymbosum L.）果实为原料，经酶解、水提取、纯化、浓缩、干燥等工艺制成的蓝莓花色苷为新食品原料[1]。可用于乳及乳制品（调制乳和风味发酵乳0.8 g/kg，调制乳粉按照冲调后液体质量折算，干酪、再制干酪、干酪制品、炼乳按照生乳原料倍数折算），饮料类（液体饮料0.8 g/kg，固体饮料按照冲调后液体质量折算），果冻（14 g/kg），可可制品、巧克力和巧克力制品（包括代可可脂巧克力及制品）（14 g/kg），糖果（40 g/kg），冷冻饮品（8g/kg），焙烤食品（4 g/kg），酒类（4 g/kg）[1]。婴幼儿、孕妇和哺乳期妇女不宜食用，标签、介绍应当标注不适宜人群和食用限量[1]。
9 使用范围和最大使用量
乳及乳制品（调制乳和风味发酵乳0.8 g/kg，调制乳粉按照冲调后液体质量折算，干酪、再制干酪、干酪制品、炼乳按照生乳原料倍数折算），饮料类（液体饮料0.8 g/kg，固体饮料按照冲调后液体质量折算），果冻（14 g/kg），可可制品、巧克力和巧克力制品（包括代可可脂巧克力及制品）（14 g/kg），糖果（40 g/kg），冷冻饮品（8g/kg），焙烤食品（4 g/kg），酒类（4 g/kg）。
10 质量要求
10.1 感官要求
感官要求应符合表 1 的要求。表 1 感官要求
| 项目 | 要求 | 检验方法 |
| 色泽 | 深紫色 | 取适量样品置于洁净的白色瓷盘中，在自然光线下观察其色泽和状态，于透明玻璃烧杯内用水稀释后，立即嗅其香气，辨其滋味，静置 2 min 后，看烧杯底部有无杂质。 |
| 状态 | 无定形粉末 | |
| 气味 | 蓝莓特有的滋味和气味 | |
| 杂质 | 无肉眼可见异物 |
10.2 理化指标
理化指标应符合表 2 的规定。
表2 理化指标
| 项目 | 要求 | 检验方法 |
| 总花色苷含量（以矢车菊素-3-O-葡萄糖苷氯化物计），g/100 g | ≥40.0 | 附录A |
| 总花青素含量（以矢车菊素氯化物计），g/100 g | ≤ 1.0 | 附录A |
| 水分，g/100 g | ≤ 5.0 | GB 5009.3 |
| 灰分，g/100 g | ≤ 3.0 | GB 5009.4 |
| 粒度（80 目筛通过率），% | ≥ 95 | 《中华人民共和国药典》四部通则0982“粒度和粒度分布测定法” |
| 二乙烯苯，μg/kg | ≤ 50.0 | 《中华人民共和国药典》四部通则0861“残留溶剂测定法” |
| 铅（Pb），mg/kg | ≤ 0.1 | GB 5009.12 |
| 总砷（As），mg/kg | ≤ 0.5 | GB 5009.11 |
| 镉（Cd），mg/kg | ≤ 0.1 | GB 5009.15 |
| 总汞（Hg），mg/kg | ≤ 0.1 | GB 5009.17 |
| 六六六（HCH），mg/kg | ≤ 0.05 | GB 23200.113 |
| 滴滴涕（DDT），mg/kg | ≤ 0.05 | GB 23200.113 |
10.3 微生物限量
表 3 微生物限量
11 附录 A 总花色苷及总花青素测定方法高效液相色谱法
11.1 A.1 原理
11.2 A.2 仪器
A.2.1 分析天平，感量为 0.01 mg 和1 mg。
A.2.3 高效液相色谱仪（附紫外检测器或二极管阵列检测器）。
A.2.4 有机相 0.45 μm 微孔滤膜。
11.3 A.3 试剂和溶液
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682 规定的一级水。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。
A.3.1 甲醇，色谱纯。
A.3.2 乙腈，色谱纯。
A.3.3 无水甲酸，色谱纯。
A.3.4 盐酸。
A.3.5 磷酸。
A.3.6 2%盐酸-甲醇溶液：准确量取盐酸20 mL加入800mL甲醇中，再用甲醇定容到 1000 mL，摇匀，即得。
A.3.7 10%磷酸水溶液：准确量取磷酸10 mL，加入80mL水中，再用水稀释至 100 mL，摇匀，即得。
A.3.8 花色苷标准品：矢车菊素-3-O-葡萄糖苷氯化物（CAS号：7084-24-4），纯度≥96%。
A.3.9 花青素标准品：矢车菊素氯化物（CAS 号：528-58-5），纯度≥96%。
A.3.10 花色苷标准储备液的配制：准确称取花色苷标准品9.60 mg 于烧杯中，用适量 2%盐酸-甲醇溶液超声2 min完全溶解，转移至 25 mL 容量瓶中，冷却至室温，用2%盐酸-甲醇溶液定容，即得矢车菊素-3-O-葡萄糖苷氯化物浓度为400μg/mL 的花色苷标准储备液（-18℃可保存7 个月）。
A.3.11 花色苷标准使用液的配制：准确移取5.00 mL花色苷标准储备液至 25 mL 的容量瓶中，用10%磷酸水溶液定容，即得矢车菊素-3-O-葡萄糖苷氯化物浓度为80 μg/mL的花色苷标准使用液（-18℃可保存 1 个月）。
A.3.12 花青素标准储备液的配制：准确称取花青素标准品9.60mg，置于烧杯中，用适量2%盐酸-甲醇溶液超声2min完全溶解，转移至 25 mL 容量瓶中，冷却至室温，用2%盐酸-甲醇溶液定容，即得矢车菊素氯化物浓度为400 μg/mL的花青素标准储备液（-18℃可保存7 个月）。
A.3.13 花青素标准使用液的配制：准确移取1.00 mL花青素标准储备液至 100 mL 的容量瓶中，用10%磷酸水溶液定容，即得矢车菊素氯化物浓度为 4 μg/mL 的花青素标准使用液（-18℃可保存 1 个月）。
11.4 A.4 色谱条件
A.4.1 色谱柱：Zorbax Extend-C18柱，250 mm×4.6 mm，5μm，或等效色谱柱。
A.4.2 进样量：20 µL。
A.4.3 流动相 A：10%甲酸水溶液。A.4.4 流动相 B：甲酸:水:乙腈:甲醇=40:160:90:90。A.4.5 流速：1.0 mL/min。
A.4.6 波长：535 nm。
A.4.7 柱温：30℃。
11.5 A.5 操作方法
A.5.1 样品溶液的制备：称取 0.12500 g 蓝莓花色苷待测样品，置于烧杯中，用适量 2%盐酸-甲醇溶液超声2 min 完全溶解，转移至 25 mL 容量瓶中，再加入2%盐酸-甲醇溶液10mL，超声 5 min，冷却至室温，用 2%盐酸-甲醇溶液定容。准确移取上述溶液 5 mL 至 25 mL 的容量瓶中，用10%磷酸水溶液定容，用 0.45 μm 微孔滤膜过滤，即得样品溶液。
A.5.2 测定：取花色苷标准使用液、花青素标准使用液、样品溶液，依次注入高效液相色谱仪进行测定，按外标法计算总花色苷含量和总花青素含量。
11.6 A.6 总花色苷含量的结果计算
样品中总花色苷的含量按式（1）计算：
式中：
X—样品中总花色苷含量（以矢车菊素-3-O-葡萄糖苷氯化物计），单位为克每百克（g/100 g）；
∑Ai—样品溶液的液相色谱图中对应各个花色苷（峰序号为 1-8、10-15、17）的峰面积之和；
A1—花色苷标准使用液的液相色谱图中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷氯化物的峰面积；
W1—样品的质量，单位为克（g）；
W2—花色苷标准品的质量，单位为克（g）；计算结果保留小数点后两位有效数字。
11.7 A.7 总花青素含量的结果计算
式中：
X—样品中总花青素含量（以矢车菊素氯化物计），单位为克每百克（g/100 g）；
∑Ai—样品溶液的液相色谱图中对应各个花青素（峰序号为 9、16、18-20）的峰面积之和；
A1—花青素标准使用液的液相色谱图中矢车菊素氯化物的峰面积；
W1—样品的质量，单位为克（g）；
125—样品总稀释倍数；
计算结果保留小数点后两位有效数字。
11.8 A.8 技术参数
当取样量为 0.125 g，本方法总花色苷的检出限为3g/100g，定量限为 10 g/100 g；总花青素的检出限为0.2 g/100g，定量限为 0.5 g/100 g。
11.9 A.9 精密度
在重复性条件下获得的两次总花色苷含量独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的3%。在重复性条件下获得的两次总花青素含量独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的4%。
11.10 附录
液相色谱图图
A.2 液相色谱峰对应组分峰序号
图 A.2 矢车菊素-3-O-葡萄糖苷氯化物标准参考液相色谱图图
A.3 矢车菊素氯化物标准参考液相色谱图
12 参考资料
- ^ [1] 国家卫生健康委．关于蓝莓花色苷等14种“三新食品”的公告（2023年 第3号）[Z]．2023-04-19．