2 英文参考
Urine—Determination of phenol—Gas chromatographic method—I Liquid crystal column
中华人民共和国卫生行业标准 WS/T 49—1996《尿中苯酚的气相色谱测定方法(一)液晶柱法》(Urine—Determination of phenol—Gas chromatographic method—I Liquid crystal column)由中华人民共和国卫生部于1996年10月14日发布,自1997年05月01日起实施。
6 4 试剂
本标准所用试剂除另有说明者外均为分析纯级。
4.2 盐酸,ρ20=1.19 g/mL。
4.3 无水乙醚。
4.5 固定液:液晶-双-(对-辛氧基苯甲酸)对苯二酚酯(PBOB)。
4.6 担体:Chromosorb W-AW-DMCS,80~100目。
4.7 苯酚标准溶液:称取0.0250 g苯酚,溶于少量蒸馏水中,将此溶液转移至50 mL容量瓶中,加水至刻度,此溶液1 mL=500μg苯酚,为标准贮备液。取贮备液用水稀释成1 mL=100μg苯酚为标准应用液。
4.8 内标(硝基苯)溶液:称取0.0250 g硝基苯,溶于蒸馏水中,转移至50 mL容量瓶中,加水至刻度,此溶液1 mL=500 μg硝基苯。
4.9 质控样:用加标的模拟尿、接触者混合尿或加标的正常人混合尿作质控样。
8 6 分析步骤
8.1 6.1 仪器操作条件
色谱柱:柱长2m,内径3 mm,不锈钢或玻璃柱。
担体:固定液:磷酸:载体=15:0.5:100。150℃通氮气老化8h。
柱温:每次实验开始,在140℃恒温th,降至112℃稳定后工作。
汽化室温度:180℃。 检测室温度:160℃。
载气:氮气,20 mL/min。
8.2 6.2 样品处理
取5 mL尿样(5)于具塞试管中,加入1 mL盐酸,摇匀,加塞。于90℃水浴恒温1h后,取出冷至室温,加0.2 mL内标溶液(4.8),加水稀释至10 mL,放冰水浴冷至0℃(约5 min)。各加3 mL乙醚,加塞振摇1 min。静置分层,必要时离心。
8.3 6.3 标准曲线的绘制
6.3.1 取7只10 mL具塞试管,分别加入0,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,6.0 mL苯酚标准应用液(4.7),各加水(4.1)至6 mL,然后分别加入0.2 mL内标溶液(4.8),1.0 mL盐酸(4.2),并加水至10 mL刻度,摇匀。此时标准管系列中苯酚浓度分别为0,2.5,5.0,10.0,20.0,40.0,60.0 mL/L。
6.3.2 上列标准管各加3.0 mL无水乙醚,加塞振摇1 min后,静止分层,取5μL乙醚萃取液进样测定。以苯酚浓度(mg/L)为横坐标,苯酚峰高与内标峰高比为纵坐标,绘制标准曲线。
酚的混合标样色谱图
8.4 6.4 样品测定
取经处理的样品乙醚液(6.2)5μL,进气相色谱仪测试。见上图。根据测得的苯酚峰高与内标峰高比值查标准曲线,再根据公式进行计算。
9 7 计算
7.1 按式(1)计算尿样换算成标准比重(1.020)下的浓度校正系数(k)。
7.2 按式(2)计算尿中苯酚的浓度。
式中:X——尿中酚的浓度,mg/L;
c——由标准曲线查得的苯酚浓度,mg/L;
V——尿样体积,mL;
10——尿样处理时加水至10 mL体积。
10 8 说明
8.1 本标准尿液中最低检测浓度为0.1 mg/L(检测限1.25 ng),标准曲线线性范围0~60 mg/L(苯酚量0~1000 mg);精密度CV=1.0%~3.1%(酚浓度为5~40 mg/L.n=6);加标回收率为77.5%~81.0%(尿样本底浓度为6.9~34.0mg/L.加标量10~40 mg/L,n=6).
8.2 对正常人,一般都取晨尿分析。对接触者因开始接触苯后尿酚浓度迅速上升,脱离接触后又很快下降,故取班末尿为宜。采集尿样时应注意防止污染。采样后测量比重,尽快运回实验室,如暂不进行分析需存放在4℃冰箱中。
8.3 本法采用酸解法处理样品,同美国NIOSH采用的方法一致。德国用水蒸气蒸馏法处理样品。二法相比,测得结果相同,但酸解法更为简便实用。
8.4 乙醚与异丙醚都可作萃取剂。异丙醚不与水互溶,沸点高,色谱峰窄,但价格较贵。故推荐乙醚为萃取剂,但乙醚在水中有一定溶解度,且易挥发,萃取前后的样品及接触乙醚的器皿要放在冰瓶中,并尽快进行分析。
8.5 本法苯酚贮备液和标准应用液均配制在水溶液中,可于4℃冰箱中保存备用。标准管与尿样采用相同萃取步骤和操作,可补偿因乙醚在水中有一定溶解度所引起的测定误差。
8.6 亦可采用外标法定量,对标准系列和样品管中都不用加内标液,直接以峰高定量。但在萃取和进样时须仔细操作。
8.7 液晶柱可分离苯酚及邻、间、对位甲酚,不仅适用于接触苯者的生物监测,且适用于接触甲苯者的生物监测。
8.8 质控样用加标的模拟尿时可考察准确度和精确度。用接触者尿或加标的正常尿时可考察精密度。但人尿不易久存。模拟尿只含人尿中大量成分。