1 概述
丁型肝炎病毒(Hepatitis D Virus,HDV)是一种缺陷性单股负链RNA病毒,直径为35~37nm,呈球形,其外膜为HBsAg,核心内含有特异的丁型肝炎病毒抗原(HDAg)和病毒RNA。HDV在成熟过程中,需要借助于HBsAg作为外膜蛋白而装配成完整的病毒颗粒。HDV本身不能感染,只能感染HBsAg阳性者。HDVAg抗原性较强,可刺激机体产生IgM和IgG抗体,这些抗体均为非中和抗体,对机体无保护作用。
HDV的实验室检测可用核酸杂交和PCR方法检测其RNA,也可用ELISA法和RIA法检测HDVAg、抗-HDV IgM、抗-HDV总抗体。
3 丁型肝炎抗体的医学检查
3.1 检查名称
3.2 分类
3.3 丁型肝炎抗体的测定原理
采用双抗体夹心ELISA法。先用去污剂(Tween 20或NP40)裂解在外面的HBsAg膜,则释放出的HDVAg与包被在板上的抗-HDV IgG结合,洗涤后加入酶标抗-HDV,显色为阳性,无色为阴性。RIA法原理基本同上述。
3.4 试剂
国内有商品化试剂盒供应,内含HDV包被反应板(条),抗HDV-HRP应用液以及抗HDV阴、阳性对照血清,底物液,终止液等试剂。
3.5 操作方法
按试剂盒使用说明书进行操作。
(1)加样品:在包被反应板各孔内加入样品50μl,每次检验设阴、阳性对照,37℃保温1h,洗板3次。
(2)加酶结合物:每孔加入抗HDV-HRP 50μl,37℃保温1h,洗板5次。
(3)显色:各孔加入底物液100μl,室温保温15min后,各孔加入终止液50μl。
(4)结果判读:在酶标仪上以试剂空白校零点,测各孔在492nm光密度值,先计算判断值,然后判断结果:
3.6 正常值
阴性。
3.7 化验结果临床意义
①高滴度只见于慢性HBsAg携带者,HBsAg持续阳性者该滴度保持不变,急性肝炎则较低。
②无症状慢性HBsAg带者出现高滴度抗-δ且持续时间较久,则为慢性肝炎。
③抗原仅存于HBsAg阳性者的肝细胞内,血中测不出,但可测出抗-δ。测定血中的抗-δ可作为识别δ感染和开展流行病学调查方法之一。
(2)阴性:
②当HBsAg转阴和GPT正常后数周,抗-δ消失。
3.8 附注
(1)由于丁型肝炎与乙型肝炎感染同时存在,外周血经除污剂处理后,可能HBAg与HBcAg同时存在,因此要注意注意防止HBcAg的干扰,故酶标记物中必须加入非标记的特异性中和HBcAg的单克隆抗体以排除之。