第六节 目的基因序列克隆的筛选与鉴定
...青霉素(anpr)、抗四环素(terr)、抗卡那霉素(kanr)等。当培养基中含有抗生素时,只有携带相应抗药性基因载体的细胞才能生存繁殖,这就把凡未能接受载体DNA的细胞全部筛除掉了。如果外源目的序列是插入在载体的抗药性基因...
医源资料库;医源图书馆;教材类;生物化学与分子生物学枯草杆菌对氨茴环霉素的抗性
...体上抗性片段获得的重组质粒。菌株一般在LB液体或固体培养基37℃培养。 2.抗生素和抗性测定:阿霉素(doxorubicin,DXR)、表阿霉素(epirubicin,EPR)、碘阿霉素(iododoxorubicin,IDX)、柔红霉素(daunorubicin,DNR)和去甲柔红霉素(4-demethydaunorubici...
合作平台;医学论文;临床医学与专科论文;检验医学G418
...18是一种氨基糖苷类抗生素,这种氨基糖类抗生素的结构和新霉素、庆大霉素、卡那霉素相似,在分子遗传试验中,是稳定转染最常用的抗性筛选试剂。它通过抑制转座子Tn601,Tn5的基因,干扰核糖体功能而阻断蛋白质合成,对原核和...
药品天地;专业药学;实验技术;基本实验技术;常用试剂版纳园能源植物小桐子遗传转化技术研究取得进展
...杆菌感染的受体,与农杆菌共培养后先接种在无筛选剂的培养基上进行愈伤诱导培养4周后,再继代到以卡那霉素作为筛选剂的选择培养基上,可成功筛选到抗性芽,并获得转基因植株。该小桐子转基因方法的建立,为今后进一...
医药经济;生物技术;技术要闻特异性沉默EBV潜伏期基因LMP1pSUPERretroRNAi系统的构建
...的shRNA;该质粒的报告基因绿色荧光蛋白基因(gfp基因)和新霉素抗性基因(neo基因)可用于阳性克隆的筛选。 1.3.3寡核苷酸与pSUPER载体的连接 将带有BglⅡ和HindⅢ酶切黏性末端的60nt正义和反义寡核苷酸分别溶于无菌无核...
医源资料库;在线期刊;齐鲁医学杂志;2006年第21卷第3期深黄被孢霉Δ6脂肪酸脱氢酶基因的原核表达和转基因植株再生研究
...植体诱导出丛生芽和再生植株,利用卡那霉素的抗性筛选培养基连续筛选以及PCR方法、DNA分子杂交分析和GC分析检测转基因植株中的Δ6脂肪酸脱氢酶基因表达状况。结果经过含50mg/L卡那霉素的抗性筛选培养基连续筛选,获得了...
医源资料库;在线期刊;成都医学院学报;2009年第4卷第1期简化的两步法细菌内同源重组高效制备p53基因重组腺病毒表达载体
...克隆连接到经相同酶切的pshuttle-cmv转移质粒上,转化DH5α筛选卡那霉素抗性菌落构建重组腺病毒转移质粒pshuttle-cmv-p53用Pmel酶切线性化采用两步法进行同源重组:先将腺病毒骨架质料pAdEasy-1转化氯化钙法制备的BJ5183感受态细菌,...
医源资料库;在线期刊;中华医药杂志;2006年第6卷第2期第二节 转基因小鼠的制备
...roporation)法将重组体导入ES细胞,继续作体外培养,并以新霉素(G418)和致死核苷类似物(GANC)作双重筛选。因随机插入的DNA通常以从头至尾整合入受体细胞DNA中,HSV-tk+基因产物可使GANC转变成一种有毒物质使细胞死亡。如果...
医源资料库;医源图书馆;教材类;动脉粥样硬化抗登革病毒3型单链抗体的基因克隆表达和免疫学鉴定
...,经IgG亚类鉴定是IgG1,杂交细胞在含有10%牛血清的1640RPMI培养基上培养。 1.2 杂交瘤细胞mRMA的提取 用Promega公司的总RNA提取试剂盒提取总RNA。然后用Promega公司mRNA提取试剂盒从总RNA中提取mRNA,方法见说明书。 1.3 cDNA的...
合作平台;医学论文;临床医学与专科论文;检验医学肿瘤坏死因子-α基因联合氟尿嘧啶治疗胰腺癌的研究
...,将TNF-α基因转导致人胰腺癌细胞株PC-3,经氨基糖甙类新霉素衍生物Geneticin(G418)筛选获得了抗性克隆。用逆转录聚合酶链方法检测胰腺癌细胞株转染TNF-α的基因表达情况,同时用放线菌素D处理后的小鼠成纤维肉瘤细胞L929检测转...
合作平台;医学论文;特种医学及其他学科论文;实验医学