第三节 基因扩增技术(PCR)
第三节 基因扩增技术(PCR) 聚合酶链反应(polymerasechainreaction简称PCR)又称无细胞分子克隆系统或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法,是基因扩增技术的一次重大革新。可将极微量的靶DNA特异地扩增上百万倍,从而大...
医源资料库;医源图书馆;教材类;基因诊断与性传播疾病分子生物学试验方法探讨四-PCR常见问题
...测,大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性,不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及,④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板:①模...
医药经济;生物技术;实验技术;生化与分子技术应用PCR-RFLP技术进行ABO基因分型研究
...立PCR-RFLP技术鉴定ABO血型基因型的方法。方法应用PCR技术扩增ABO基因第六外显子上分别包含258位核苷酸和700位核苷酸的两个DNA片段,分别用KpnI和AluI酶解PCR扩增产物,电泳分离鉴定ABO血型基因型,同时对上述两种PCR扩增的DNA片段...
医源资料库;在线期刊;中国热带医学杂志;2008年第8卷第8期PCRTroubleshootingguide
1.假阴性,不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量,④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板:①模板中含有杂蛋白质,②模板中含有Taq酶...
医药经济;生物技术;实验技术;生化与分子技术PCR问题的总结
...测,大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性,不出现扩增条带 pcr反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及活性④pcr循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板:①...
医药经济;生物技术;实验技术;生化与分子技术毛细管电泳·激光诱导荧光检测分枝杆菌脱氧核糖核酸限制性内切酶谱
...核酸(DNA)限制性内切酶谱的新方法。用聚合酶链反应(PCR)扩增分枝杆菌hsp65基因的长度为439bp的片段,该扩增片段经限制性内切酶BstEII和HaeⅢ酶切后,分别用CE-LIFD装置和常规琼脂糖电泳(AGE)对比检测酶切片段。对PCR扩增片段的酶切...
药品天地;专业药学;实验技术;色谱技术;色谱分析实例第三节 PCR操作范例及反应体系的组成
...5min;在末次循环后,样品仍需继续延伸3~5min以上,确保扩增的DNA为双链DNA。为便于了解PCR反应中各成份的组成,加入量和反应条件,使人们以此为基础,对不同的研究对象逐项改变来找到最佳反应条件,特列举PerkinElmerCetus公...
医源资料库;医源图书馆;教材类;实用免疫细胞与核酸mRNA差别显示技术(DDRT-PCR)
...种下游引物,称3′-锚定引物,其通式为5’-T11MN;同时为扩增出polyA上游500bp以内所有可能性的mRNA序列,在5′端又设计了20种10bp长的随机引物。这样构成的引物对进行PCR扩增能产生出20000条左右的DNA条带,其中每一条都代表一种...
医药经济;生物技术;实验技术;生化与分子技术第四节 影响PCR的主要因素
...延伸的条件是:94℃60s,37℃60s,72℃120s,共25~30个循环,扩增片段500bp。在这里,每一步的时间应从反应混合液达到所要求的温度后开始计算。在自动热循环仪内由混合液原温度变至所要求温度的时间需要30~60s,这一迟滞时间的...
医源资料库;医源图书馆;教材类;实用免疫细胞与核酸rBPI23基因克隆与鉴定
...600bp)克隆与鉴定。方法:采用RT-PCR技术,从HL-60细胞mRNA中扩增编码BPIN端199个氨基酸(rBPI23)的基因片段(BPI600bp),经酶切后通过连接反应构建重组克隆载体,测序鉴定。结果:RT-PCR获得预期的扩增产物—BPI600bp基因片段。成功构建PUC...
合作平台;医学论文;临床医学与专科论文;检验医学