丹参对硬皮病成纤维细胞基质金属蛋白酶1作用的研究
...rthern杂交[5]总RNA的提取采用Trizol裂解液(含38%酚,2M异硫氰酸胍和0.4M异硫氰酸胺)进行提取。每个泳道加入总RNA量为10μg。将RNA与适当浓度的MOPS、甲醛、甲酰胺混合后,65℃变性。再经速冷后采用1.5%甲醛变性凝胶电泳分离。...
合作平台;在线期刊;中华医药杂志;2004年第4卷第6期;论著RNA的提取和cDNA合成
...理水配制,并尽可能用未曾开封的试剂。除DEPC外,也可用异硫氰酸胍、钒氧核苷酸复合物、RNA酶抑制蛋白等。此外,为了避免mRNA或cDNA吸附在玻璃或塑料器皿管壁上,所有器皿一律需经硅烷化处理。 细胞内总RNA制备方法很多,如异...
医药经济;生物技术;实验技术;生化与分子技术人整合素分子α4亚基片段的克隆及大肠杆菌的表达
...DNA多聚酶、限制性内切酶EcoRI、HindⅢ、PstI、XbaI、XhoI、异硫氰酸胍购自华美公司;引物由上海生工生物工程有限公司合成;焦磷酸二乙酯(DEPC)为Sigma公司产品。 1.2 总RAN提取 异硫氰酸胍一步法提取总RNA[3]。 1.3 ...
合作平台;医学论文;临床医学与专科论文;检验医学甲型肝炎病毒经猴体传代后核苷酸变异的研究
...nemeyer等改良法分离纯化,获得猴传代株Gkm/M。病毒再经异硫氰酸胍提取RNA后,用逆转录-聚合酶链反应扩增5′非编码区(5′NTR)(+56/-293)和VP1/2A区(+2984/-3265),反应条件为逆转录42℃45min,PCR反应为94℃30s,52℃30s,72℃60s,共循环33周...
合作平台;医学论文;临床医学与专科论文;检验医学幽门螺杆菌感染儿童胃窦黏膜CD4+、CD8+的研究
...外周静脉血2ml。提取的胃窦黏膜及外周血单个核细胞经异硫氰酸荧光素标记CD3(CD3-FITC)、藻红蛋白标记CD4(CD4-PE)、多甲藻(黄)素叶绿素蛋白标记CD8(CD8-PerCP)单克隆抗体染色后行流式细胞术测定,其中胃窦黏膜T淋巴细胞的检测以CD3设...
行业资讯;临床快报;小儿科一般鉴别试验
...化钠试液,即分解成棕色沉淀。 (2)取供试品溶液,加硫氰酸铵试液,即显血红色。 铵盐 (1)取供试品,加过量的氢氧化钠试液后,加热,即分解,发生氨臭;遇湿润的红色石蕊试纸,能使之变蓝色,并能使硝酸亚汞试...
药品天地;专业药学;中国药典;2000版二部附录登革病毒NS3全基因的扩增与克隆
...达2+~3+时,取200μL病毒培养上清液,根据Chomczynskin的异硫氰酸胍氯仿快速一步法[5]略加改良后,提取病毒核酸RNA。简言之,在200μL的病毒培养上清液中加入3倍体积的变性液(含4mol/L异硫氰酸胍,25mmol/L柠檬酸钠,0.5%十二烷基...
合作平台;医学论文;临床医学与专科论文;检验医学肝吸虫病
...轻重而定,轻者可用75mg/kg或210mg/kg的5天疗法。(二)硝硫氰胺(Nitrocyanamin7505)3-6um的微粉胶囊,总剂量为6-8mg./kg等分3-5份,每天1份,本药副作用较多,少数可出现黄疸。各种原因的黄疸、急慢性肝炎恢复未满一年,有精神...
求医问药;疾病大全;腹部人乳头瘤病毒16型(湖北株)E7基因逆转录病毒重组体的构建及在真核细胞中表达
...基因mRNA转录。细胞涂片经过E7蛋白单抗和羊抗鼠IgG-FITC(异硫氰酸荧光素)染色,转染后48小时的涂片在荧光显微镜下可看到特异性的颗粒状黄绿色荧光,72~96小时荧光反应最强,120小时后部分细胞出现裂解。这表明HPV16(湖北株)E7...
合作平台;医学论文;临床医学与专科论文;检验医学高亲和力IgE受体α链基因亚型的发现及其cDNA序列的克隆
...肝素抗凝血10ml,用密度梯度离心法富集嗜碱粒细胞,异硫氰酸胍一步法提取总RNA,以此为模板进行RT-PCR,产物克隆入pGEX-4T-1载体,进行自动测序。另取5例不同个体的血样,提总RNA后,与上面个体来源的RNA一起进行PCR-SSCP分析。PC...
合作平台;医学论文;临床医学与专科论文;检验医学