丙型肝炎病毒Core基因重组表达载体Pet32a-Core的构建
...中的IgG抗体,并提取HCV抗体阳性的患者血清中RNA作为扩增模板,反应体系25μl,即10×PCRBuffer2.5μl,MgCL25μl,dNTP2μl,RNaseinhibitor0.5μl,AMV0.5μl,Taq酶0.5μl,P1、P2各1μl,DEPC水3.5μl,RNA模板8μl,反应条件:50℃30min...
医源资料库;在线期刊;中国热带医学杂志;2008年第8卷第4期轮状病毒VP4蛋白酶切片段VP5*、VP8*在原核系统中的表达
...VP5*、VP8*。方法以猴轮状病毒SA11株细胞培养物提取总RNA为模板,经RTPCR方法获得VP5*、VP8*全长基因片段cDNA,将其重组于pET30a表达载体,转化大肠杆菌BL21(plyss),异丙基βD硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物做SDSPAGE...
医源资料库;在线期刊;滨州医学院学报;2008年第31卷第3期重组人IL-18和IL-18-GFP融合蛋白的表达及其生物学活性的研究
...,提取总RNA,以oligodT为引物进行RT-PCR得到cDNA。以该cDNA为模板用相应引物扩增IL-18cDNA,并将所得PCR产物克隆于pET28a,构建成表达质粒pET28a/hIL-18。通过三步PCR法获得编码IL-18-GFP融合蛋白的DNA片段。方法为:以IL-18cDNA为模板,用引物(...
合作平台;医学论文;临床医学与专科论文;检验医学人类8型疱疹病毒开放读码框73C基因原核
...在引物两端添加特异的酶切位点,以pGEM-Teasy/ORF73质粒为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增ORF73C基因序列,克隆入原核表达载体pET-28a(+),构建原核表达质粒pET28a-ORF73C;转化E.coliDH5α,经酶切、测序鉴定其插入序列的正确性,转入E.coliBL...
行业资讯;临床快报;遗传与基因组γ-谷氨酰转肽酶(GGT)基因克隆及在原核生物中表达*
...路。利用PCR技术,以原核生物大肠杆菌DH5a的全基因组为模板克隆出γ-谷氨酰转肽酶目的基因片段GGT,并将其转载到pET-28a上,最终转入到原核表达型宿主菌BL21中,诱导表达出γ-谷氨酰转肽酶(GGT),为利用生物转化方法生产茶氨...
医源资料库;在线期刊;中华医药杂志;2009年第9卷第8期趋化因子MIP-3α的克隆与表达
...。 1.2.2RT(逆转录)RT(逆转录)采用Improm-ⅡRTSystem,模板为提取的总RNA,引物为Oligo(dT)15,逆转录酶为Improm-ⅡTMReveseTranscriptase,25℃退火5min,42℃逆转录1h,70℃灭活逆转录酶15min,-20℃保存备用。 1.2.3PCR根据Genebank公...
医源资料库;在线期刊;局解手术学杂志;2006年第15卷第2期微小隐孢子虫重组BCG-CP15/60-23疫苗的构建及鉴定
...虫CP15/60-23基因重组卡介苗。方法以pET-30a-CP15/60-23质粒为模板,PCR扩增CP15/60-23基因片段,然后克隆至TA载体;通过酶切、测序鉴定后,将CP15/60-23基因片段用限制性内切酶切下定向克隆至大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMV262结核...
医源资料库;在线期刊;中国热带医学杂志;2008年第8卷第6期人核心蛋白聚糖的克隆及其在大肠杆菌中的表达
...P2:5‘CCCAAGCTTTTACTTATAGTTTCCGAGTT3‘,以人肝cDNA文库为模板,P1和P2为引物进行PCR扩增Decorin全长基因。扩增参数为:94℃预变性5min;94℃45s,55℃45s,72℃1min,32个循环;72℃后延伸10min。电泳观察结果。1.2.3目的基因表达质粒(pET...
医源资料库;在线期刊;滨州医学院学报;2009年第32卷第3期鸡贫血病毒VP2基因的克隆、序列分析及表达
...因工程疫苗打下了基础。 1 材料与方法 1.1 PCR模板 以含有VP2基因的SJ1株的PUC-CAV1.5kb重组质粒为模板(由本室提供)[3]。 1.2 引物设计和PCR扩增 根据基因银行记载的Cux-1株的DNA序列设计了扩增CAV-SJ1株VP2基因的引...
合作平台;医学论文;临床医学与专科论文;检验医学人活化血小板单抗SZ-51单链抗体的基因构建及高效表达
...性克隆。 (2)表达载体pHEN1-51ScFv的构建:以pSW1-51ScFv为模板,以P1与P5为引物扩增SZ-51ScFv片段并引入相应酶切位点。与表达质粒pHEN1经PstⅠ和NotⅠ双酶切后,进行连接并转化感受态细菌HB2151,经酶切鉴定筛选获得阳性克隆pHEN1-51Sc...
合作平台;医学论文;临床医学与专科论文;检验医学